內標法是把標準物質加入到被測樣品中,外標法不是把標準物質加入到被測樣品中,而是在與被測樣品相同的色譜條件下單獨測定。

選擇適宜的物質作為預測組分的參比物,定量加到樣品中去,依據欲測定組分和參比物在檢測器上的響應值(峰面積或峰高)之比和參比物加入量進行定量分析的方法叫內標法。特點是標準物質和未知樣品同時進樣,一次進樣。

在用內標法做色譜定量分析時,先配制一定重量比的被測組分和內標樣品的混合物做色譜分析,測量峰面積,做重量比和面積比的關系曲線,此曲線即為標準曲線。在實際樣品分析時所采用的色譜條件應盡可能與制作標準曲線時所用的條件一致,因此,在制作標準曲線時,不僅要注明色譜條件(如固定相、柱溫、 載氣流速等),還應注明進樣體積和內標物濃度。在制作內標標準曲線時,各點并不完全落在直線上,此時應求出面積比和重量比的比值與其平均位的標準偏差,在使用過程中應定期進行單點校正,若所得值與平均值的偏差小于2,曲線仍可使用,若大于2,則應重作曲線,如果曲線在鉸短時期內即產生變動,則不宜使用內標法定量。

外標法要求儀器重復性很嚴格,適于大量的分析樣品,因為儀器隨著使用會有所變化,因此需要定期進行曲線校正。用待測組分的純品作對照物質,以對照物質和樣品中待測組分的響應信號相比較進行定量的方法稱為外標法。此法可分為工作曲線法及外標一點法等。工作曲線法是用對照物質配制一系列濃度的對照品溶液確定工作曲線,求出斜率、截距。在完全相同的條件下,準確進樣與對照品溶液相同體積的樣品溶液, 根據待測組分的信號,從標準曲線上查出其濃度,或用回歸方程計算,工作曲線法也可以用外標二點法代替。通常截距應為零,若不等于零說明存在系統誤差。工作曲線的截距為零時,可用外標一點法(直接比較法)定量。

內標法的優點在于不需要精確控制進樣量,由進樣量不同造成的誤差不會帶到結果中。缺陷在于內標物很難尋找,而且分析操作前需要較多的處理過程,操作復雜,并可能帶來誤差。一個合適的內標物應該滿足以下要求:能夠和待測樣品互溶;出峰位置不和樣品中的組分重疊;易于做到加入濃度與待測組分濃度接近;譜圖上內標物的峰和待測組分的峰接近。

選擇內標物有幾個要求:1.內標物應是該試樣中不存在的純物質;2.它必須完全溶于試樣中,并與試樣中各組分的色譜峰能完全分離; 3.加入內標物的量應接近于被測組分;4.色譜峰的位置應與被測組分的色譜峰的位置相近,或在幾個被測組分色譜峰中間。

而外標法簡便,但進樣量要求十分準確,要嚴格控制在與標準物相同的操作條件下進行,否則造成分析誤差,得不到準確的測量結果。